بهینه سازی تولید هورمون رشد انسانی نوترکیب در سلول های cho و مقایسه فعالیت زیستی آن با نوع پروکاریوتیک هورمون رشد

thesis
abstract

هورمون رشد انسانی (hgh) یک زنجیره پلی پپتیدی منفرد شامل 191 اسیدآمینه است و توسط سلول های سوماتوتروف غده هیپوفیز تولید و ترشح می شود. سلول های پستانداران در مقایسه با سایر میزبان ها از جمله باکتری ها، به خاطر توانایی شان در ایجاد ساختار صحیح پروتئین، تجمع و اصلاحات پس از ترجمه ای، سیستم مطلوب برای تولید پروتئین های نوترکیب با کاربردهای کلینیکی هستند. امروزه با وجود در دسترس بودن رده های سلولی فراوان، نزدیک به 70% پروتئین های نوترکیب درمانی در سلول های تخمدان همستر چینی (cho) تولید می شوند. با این وجود، میزان تولید در سلول های پستانداران در مقایسه با میزبان های پروکاریوتی پایین است. افزایش تولید هورمون رشد انسانی نوترکیب در سلول های cho برای توسعه یک فرایند زیستی کارامد در مقیاس وسیع ضرور ی است. در محیط های مرسوم کشت سلول های پستانداران از سرم به عنوان مکمل استفاده می شود؛ با این وجود استفاده از سرم نگرانی هایی از قبیل هزینه بالا، مداخله در خالص سازی محصولات نوترکیب و امکان آلودگی های ویروسی را در پی دارد. بنابراین استفاده از محیط فاقد سرم مزایای زیادی برای محصولات ترشحی از قبیل هورمون رشد دارد. سنجش گزارشگر ژنی مثل سیستم گزارشگر لوسیفراز به طور وسیعی برای مطالعه ی بیان و تنظیم ژن های یوکاریوتی به کار می رود. اگرچه ژن های گزارشگر کاربردهای زیادی دارند اما اغلب به عنوان شاخص فعالیت رونویسی در سلول ها بکار می روند، بنابراین سیستم -های گزارشگر برای تعیین فعالیت زیستی مولکول ها از قبیل هورمون رشد کاربرد دارند. در مطالعه ی حاضر، ابتدا rhgh در سلول-های یوکاریوتی cho در محیط حاوی سرم تولید شد و تولید rhgh توسط الایزا، دات بلات و وسترن بلات مورد ارزیابی قرار گرفت. سلول های cho تولید کننده rhgh برای رشد در محیط فاقد سرم با استفاده از روش های سازگاری مستقیم و تدریجی تطابق پیدا کردند. سپس، تأثیر تیمارهای مختلف شامل غلظت های مختلف گلیسرول، دی متیل سولفوکساید (dmso)، سدیم بوتیرات (nabu)، سولفات روی (znso4) و تأثیر دما در تولید rhgh در سلول های cho مورد بررسی قرار گرفتند و تولید gh توسط تکنیک الایزا مورد ارزیابی قرار گرفت. در نهایت فعالیت زیستی rhgh با استفاده از ترانسفکشن همزمان سیستم ژن گزارشگر lhre-tk-luciferase با وکتور حاوی cdna رسپتور gh انسانی در سلول های hek-293 مورد ارزیابی قرار گرفت. در این مطالعه تولید rhgh در سلول های cho از طریق کنترل شرایط کشت افزایش پیدا کرد. سلول های cho در محیط فاقد سرم رشد کردند و rhgh در این محیط تولید شد. در ادامه سلول های cho توانایی رشد به حالت سوسپانسیون به جای کشت چسبنده را یافتند. تولید rhgh در سلول های cho در حالت سوسپانسیون با تولید در محیط های کامل حاوی سرم قابل مقایسه است. نتایج بیواسی نشان داد rhgh تولید شده توسط سلول های cho قادر است مسیر سیگنالینگ سلولی هورموی رشد را القا کند و فعالیت زیستی بالاتری نسبت به gh پروکاریوت و مشابه نمونه تجاری gh است. این یافته ها نشان دادند که کنترل شرایط کشت سلولی از قبیل اضافه کردن ترکیبات شیمیایی و کنترل دما به توسعه یک فرایند صنعتی و در مقیاس وسیع به تولید rhgh کمک می کند. همچنین کشت سوسپانسیون سلول های cho در محیط فاقد سرم را می توان با موفقیت بدست آورد که این امر تأثیر مهمی بر فرایندهای خالص سازی دارد. rhgh در رده سلولی پستانداران با فعالیت زیستی بالا می تواند تولید شود. سیستم گزارشگر ژنی یک روش بسیار حساس، کارا، دقیق و ایمن برای بررسی فعالیت زیستی پروتئین های نوترکیب مثل rhgh می باشد.

First 15 pages

Signup for downloading 15 first pages

Already have an account?login

similar resources

تولید هورمون رشد انسانی نوترکیب توسط سلول تخمدان هامستر چینی و بررسی فعالیت زیستی آن به روش سنجش گزارشگر ژنی

 Background: Cultivated mammalian cells, because of their capacity for proper protein folding, assembly and post–translational modification, have become the dominant system for production of recombinant proteins in clinical application. Therefore, the quality and efficacy of protein can be superior when expressed in mammalian cells compared to other hosts such as bacteria. Gene reporte...

full text

افزایش تولید هورمون رشد انسانی نوترکیب در سلول‌های CHO از طریق کنترل شرایط کشت سلولی

هدف: هدف این مطالعه افزایش تولید هورمون رشد انسانی توسط اضافه کردن ترکیبات شیمیایی به محیط کشت فاقد سرم سلول‌های CHO و بررسی خواص hGH تولید شده می‌باشد. مواد و روش‌ها: در این مطالعه، تاثیر تیمارهای مختلف شامل غلظت‌های مختلف گلیسرول،DMSO ، NaBu و ZnSO4 در سلول‌های CHO مورد بررسی قرار گرفت و تولید GH به‏روش الایزا سنجیده شد.سلول‌ها به هر چاهک یک پلیت 12 خانه حاوی DMEM-F12 و FBS10 درصد اضافه شدند...

full text

افزایش تولید هورمون رشد انسانی نوترکیب در سلول های cho از طریق کنترل شرایط کشت سلولی

هدف: هدف این مطالعه افزایش تولید هورمون رشد انسانی توسط اضافه کردن ترکیبات شیمیایی به محیط کشت فاقد سرم سلول های cho و بررسی خواص hgh تولید شده می باشد. مواد و روش ها: در این مطالعه، تاثیر تیمارهای مختلف شامل غلظت های مختلف گلیسرول،dmso ، nabu و znso4 در سلول های cho مورد بررسی قرار گرفت و تولید gh به‏روش الایزا سنجیده شد.سلول ها به هر چاهک یک پلیت 12 خانه حاوی dmem-f12 و fbs10 درصد اضافه شدند....

full text

بهینه سازی تولید هورمون رشد نوترکیب انسانی در باکتری اشرشیاکلی

چکیده هورمون رشد انسانی یا سوماتوتروپین یک پروتئین تک رشته دارای 191 اسید آمینه به صورت یک ساختار با 4 هلیکس و دارای 2 پل دی سولفیدی و وزن مولکولی حدود 22 کیلودالتون می باشد. که توسط سلول های سوماتوتروف غده هیپوفیز ساخته شده و به جریان خون آزاد می شود. به علت فعالیت های بیولوژیکی مهم و متنوع هورمون رشد، این هورمون دارای کاربردهای گسترده ایی در پزشکی و بیوتکنولوژی می باشد. هورمون رشد به عنوان...

تولید هورمون رشد انسانی نوترکیب توسط سلول تخمدان هامستر چینی و بررسی فعالیت زیستی آن به روش سنجش گزارشگر ژنی

زمینه و هدف: سلول‎های کشت شده پستانداران به خاطر تواناییشان در ایجاد ساختار صحیح پروتئین، تجمع و اصلاحات پس از ترجمه‎ای، سیستم مطلوبی برای تولید پروتئین‎های نوترکیب با کاربردهای کلینیکی هستند، بنابراین زمانی که یک پروتئین در سلول‎های پستانداران بیان ‎شود در مقایسه با سایر میزبان‎ها از جمله باکتری‎ها،کیفیت واثر بهتری، دارد. سیستم های گزارشگر ژنتیکی ((gene reporter systems به عنوان ابزاری برای مط...

full text

تولید هورمون رشد انسانی نوترکیب از سلول یوکاریوت و پروکاریوت

هورمون رشد انسانی یا سوماتوتروپین یک پروتئین تک رشته دارای 191 اسیدآمینه به صورت یک ساختار با 4 هلیکس دارای دو پل دی‎سولفیدی و وزن مولکولی حدود 22 کیلودالتون می‎باشد که توسط سلول‎های سوماتوتروف غده هیپوفیز ساخته شده و به جریان خون آزاد می‎شود. به علت فعالیت‎های بیولوژیکی مهم ومتنوع هورمون رشد، این هورمون دارای کاربردهای گسترده‎ای در پزشکی و بیوتکنولوژی می‎باشد. coli escherichia یکی از میزبان ها...

15 صفحه اول

My Resources

Save resource for easier access later

Save to my library Already added to my library

{@ msg_add @}


document type: thesis

وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه اصفهان - دانشکده علوم

Hosted on Doprax cloud platform doprax.com

copyright © 2015-2023